Métodos analíticos para detecção de glúten em alimentos: [revisão] / Analytical methods for detecting gluten in foods: [review]

O tratamento para a doença celíaca (DC) consiste em dieta livre das prolaminas: gliadina, hordeina, secalina e avenina existentes no trigo, centeio, cevada e aveia. A Comissão do Codex Alimentarius(FAO/WHO) definiu o limite de 200 ppm (mg/kg) de glúten para o alimento ser considerado livre desse produto. A revisão de 2004 do Codex Alimentarius sugeriu o limite de 20 ppm para produtos naturalmente sem glúten e de 200 ppm para produtos derivados de ingredientes não fonte de glúten, porém esses limites estão ainda em discussão. Entre os métodos analíticos para detectar ou determinar glúten/gliadina têm sido empregadas as técnicas de: espectrometria de massa, cromatografia líquida, análise de DNA do trigo e imununoenzimáticos. O método oficial adotado pela Association of Official Analytical Chemistry(AOAC) é o ELISA baseado no anticorpo monoclonal para gliadina. O Codex Alimentarius endossou temporariamente, o R5 ELISA como Método Tipo I. O R5 ELISA utiliza anticorpo monoclonal para o pentapeptídeo tóxico existente na gliadina, hordeina e secalina. O ELISA, em função de sua maior sensibilidade e apropriado limite de detecção (1,5 ppm de gliadina), é considerado superior às demais técnicas. A presença de pequenos fragmentos de proteína existentes em prolaminas hidrolisadas devem ser avaliados por métodos baseados em DNA.

Treatment of celiac disease (CD) is consisted of a diet free of prolamins as gliadin, hordein, secalin, and avenin existing in wheat, barley, rye, and oats. The Codex Alimentarius Commission (FAO/WHO) has defined the maximum gluten content of 200 ppm (mg/kg) to consider as gluten-free products. The Codex Commission Review 2004 recommended the limits of 20 mg/kg dry mass for naturally gluten- free products, and 200 mg/kg for food derived from gluten - free products. Among analytical methods for detecting or determining glúten/gliadin the following techniques have been used: mass spectrometry,high performance-liquid chromatography, wheat DNA analysis by PCR, and immunoenzyme assay. ELISA based on monoclonal antibody for ω gliadin has been the technique officially recommended by the Association of Official Analytical Chemistry (AOAC). R5-ELISA has got a provisory approval from the Codex Alimentarius as type I method. R5-ELISA is based on the use of a monoclonal antibody for pentapeptide occurring in gliadin, hordein, secalin, and avenin, and this assay presents sensitivity and limit detection (1.5 ppm gliadin) rates superior in comparison to other techniques. Although, the qualitative analysis for detecting he presence of small fragment of protein in hydrolized prolamine should be assessed by means of DNA-based techniques.

IGA1 proteases: ocorrência em agentes estiológicos de meningite / IgA1 proteases: ocurrence in meningitis etiological agents

Dentre os fatores de virulência em bactérias investigados na Seçäo de Bacteriologia do Instituto Adolfo Lutz, tem sido avaliada a ocorrência de proteases à imunoglobulina A (IgA1 proteases) em agentes etiológicos de meningite. Estas enzimas extracelulares säo produzidas por diferentes patógenos de mucosa, incluindo os três principais agentes das meningites bacterianas: Neisseria menigitidis, Haemophilus influenzae e Streptococus pneumoniae. IgA1 proteses foram detectadas por imunoeletroforese em 28 de 39 cepas estudadas, bactérias e leveduras. Com exceçäo de 7 bactérias obtidas de coleçäo de cultura, todos os microrganismos foram isolados de líquido cefalorraquidiano. Nos três agentes etiológicos mais frequentes de meningite foi observada a presença de IgA1 proteases, como também em quatro outras bactérias, das quais duas de coleçäo, e näo citadas na literatura como produtoras destas enzimas

Pesquisa de imunocomplexos circulantes em pacientes com meninogococcemia / Research of circulating immune complex in patients with meningococcemia

Pesquisa de imunocomplexos circulantes foi realizada em 15 pacientes com meningococcemia apresentando complicaçöes alérgicas, empregando o método de precipitaçäo com polietilenoglicol. Os resultados foram expressos pela comparaçäo das densidades ópticas (DO) dos eluatos e caracterizaçäo do antígeno polissacarídico nos imunocomplexos. Os pacientes analisados com meningococcemia apresentaram densidades ópticas aumentadas (0,570 a 0,257), quando comparadas àquela obtida em 33 soros controles (0,108) provenientes de doadores de Banco de Sangue. Foi possível em 12 casos a recuperaçäo do antígeno polissacarídico da N. meningitidis destes complexos através da dissociaçäo ácida e identificaçäo pela reaçäo de inibiçäo de hemaglutinaçäo

Fraccionamento do veneno Crotalus durissus terrificus por cromatografia de exclusäo molecular / Fractitionation of Crotalus durissus terrificus venom by molecular exclusion chromatography

Através da técnica de cromatografia de exclusäo molecular utilizando Sephadex G-75 foram estudadas as diferentes fraçöes do veneno de Crotalus durissus terrificus, uma das serpentes peçonhentas mais comuns no Brasil. Foram obtidos 4 picos (correspondentes às fraçöes 32,60,86 e 103) com peso molecular variando de 4.000 a 150.000. As fraçöes de todo o diagrama de gel filtraçäo foram triadas através de reaçäo de imunoeletroforese a fim de se verificar suas cargas e velocidade de migraçäo. As linhas de precipitaçäo encontradas foram comparadas às 11 linhas apresentadas pela reaçäo de imunoeletroforese do veneno total contra o soro anti-crotálico. Constatou-se que as fraçöes de um mesmo pico apresentavam características próprias com exeçäo da frraçäo 54 (subida do pico II) que mostrou diferenças significativas em relaçäo à fraçäo 60. Após a triagem foram escolhidas as fraçöes de cada pico onde as linhas de precipitaçäo foram mais nítidas e intensas, para estudo de identidade através da reaçäo de difusäo radial dupla e letalidade comparada a concentraçäo de 0,0625 mg/ml do veneno total que corresponde a DL50 em camundongo pelo método de SPEARM & KARBER. As fraçöes 32, 86 e 103 correspondentes respectivamente aos picos I, III e IV apresentaram letalidade nula ou negligenciada e a fraçäo II foi a mais tóxica

Anticorpos específicos das classes IgG, IgM e IgA para Paracoccidioide brasiliensis dosados através da reação de imunofluorescência indireta no soro de pacientes e sua correlação com o tempo de evolução e forma clínica da doença / Specific antibodies of IgG, IgM and IgA classes for Paracoccidoiodes brasiliensis titrated by immunofluorescence test in serum of 18 patients and their correlation with development time and clinical form of the disease

Foram estudados 18 pacientes com paracoccidioidomicose com a finalidade de comparar a reação de imunofluorescência indireta com as reações de fixação de complemento e precipitação feita em tubos. Foi constatada correlação da reação de imunofluorescência indireta e da reação de fixação de complemento, tendo sido sugerido o seu emprego no diagnóstico da doença. Não foi possível cor relacionar a presença de IgG, IgM e IgA específicas para Ptiracoccidioide bmsiliensis com as formas clínicas da doença; no entanto, notou-se que imunoglobulinas do tipo IgM estavam presentes em doentes com comprometimento gang lionar. Quanto ao tempo da doença verificou-se que o IgA específico para P. bmsiliensis apresentava-se sempre positivo em maior porcentagem nos casos de tempo de evolução inferior a um ano (AU).